液相色譜儀根據(jù)固定相是液體或是固體，又分為液-液色譜(LLC）及液-固色譜(LSC）�，F(xiàn)代液相色譜儀由高壓輸液泵、進(jìn)樣體系、溫度控制體系、色譜柱、檢測器、信號(hào)記載體系等部分組成。與經(jīng)典液相柱色譜裝置比較，具有高效、快速、靈敏等特點(diǎn)。其首要操作過程、原理，注意事項(xiàng)如下。

一、 水相中的溶質(zhì)溶解辦法

水相中需溶解的無機(jī)鹽和表面活性劑等固體溶質(zhì)，主張選用加熱法，不主張選用振搖、超聲等辦法。因此種辦法的溶解，溶質(zhì)可能處于“臨界膠團(tuán)濃度”，這以后一旦遇到某特殊景象（如遇有機(jī)溶劑、溫度劇降等），極易分出少數(shù)結(jié)晶；而一旦分出，便將損害儀器和色譜柱，出現(xiàn)泵頭處分出“鹽和白粉”的現(xiàn)象。

二、 活動(dòng)相的制造與運(yùn)用

1. 恒度洗脫

一定是將水相與有機(jī)相混合后、抽濾（運(yùn)用混合型過濾膜），用一個(gè)管路（如A管）泵入儀器，這是運(yùn)用的原則。切勿因節(jié)約有機(jī)相、便于摸索色譜條件等原因而運(yùn)用兩個(gè)管路（一個(gè)純水相、一個(gè)純有機(jī)相）泵入儀器，即便制造了脫氣機(jī)。因此種景象極易造成水相中鹽和表面活性劑的少數(shù)分出。

  剩余活動(dòng)相完全可持續(xù)運(yùn)用，密封后放置陰涼處；待下次實(shí)驗(yàn)時(shí)與新制造的活動(dòng)相混合后抽濾即可。無需憂慮發(fā)霉、無機(jī)鹽分出、蒸發(fā)、份額不準(zhǔn)等問題，這些皆為疑神疑鬼的體現(xiàn)。實(shí)踐是檢驗(yàn)真理的唯一標(biāo)準(zhǔn)！實(shí)踐吧~

2. 梯度洗脫

活動(dòng)相制造*為科學(xué)的辦法是：A相為高份額的水相-低份額的有機(jī)相、B相為低份額的水相-高份額的有機(jī)相（英國藥典幾乎均如此）；其次為：A相為高份額的水相-低份額的有機(jī)相、B相為純有機(jī)相；*不科學(xué)的為：A相為純水相、B相為純有機(jī)相，如既有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)選用了此種辦法，主張改為第二種或榜首種辦法，否則基線漂移嚴(yán)峻，難以進(jìn)行安穩(wěn)的雜質(zhì)檢測。

梯度洗脫完畢后，主張經(jīng)5分鐘回到初始狀態(tài)，再平衡5分鐘后開端下一針測定。這10分鐘的安穩(wěn)極為要害。切勿短時(shí)刻內(nèi)回到初始狀態(tài)，會(huì)對(duì)儀器和色譜柱損害較大。

三、 色譜柱的裝置

標(biāo)準(zhǔn)SOP應(yīng)為：

取A管路放入活動(dòng)相瓶中→擰松泵頭→流速由0ml/min逐漸升至10ml/min，調(diào)查尾液是否呈瀑布狀流出，持續(xù)10秒→擰緊泵頭→活動(dòng)相呈拋射狀從裝置色譜柱的一端噴出，觀測是否呈拋物線狀，持續(xù)5秒→流速逐步降至1.0ml/min →裝置色譜柱，待20秒后，活動(dòng)相從色譜柱另一端呈泉水狀涌出再裝置另一端→手握兩頭螺絲帽，擰緊。

以上裝置次序遵從的是：

逐級(jí)排放氣泡和儀器內(nèi)存留的洗液，使得裝置后氣泡極難混入。自己曾實(shí)驗(yàn)梯度洗脫連續(xù)一周，榜首針與*終一針主成分保留時(shí)刻相差在6秒以內(nèi)。

四、 實(shí)驗(yàn)后色譜柱的清洗

1.*為常用的C8柱、C18柱

1.1 活動(dòng)相僅為乙腈-水或甲醇-水時(shí)，持續(xù)沖刷30分鐘，流速1.0ml/min，柱溫保持實(shí)驗(yàn)時(shí)溫度，即可。

1.2 水相中有無機(jī)鹽、表面活性劑或三乙胺、高氯酸等物質(zhì)時(shí)先選用純水（或含有2%甲醇），沖刷A管路（實(shí)驗(yàn)選用哪個(gè)管路，就要從頭到尾沖刷該管路），時(shí)刻30分鐘（如活動(dòng)相中有表面活性劑，適當(dāng)增加時(shí)刻），流速1.0ml/min，柱溫可較實(shí)驗(yàn)溫度高出5~10℃；隨后更換成20%甲醇再?zèng)_刷30分鐘，流速1.0ml/min，柱溫箱加熱裝置關(guān)閉。完畢后取下色譜柱放置陰涼處。

1.3 很多同仁這以后選用高份額的甲醇沖刷，實(shí)屬畫蛇添足，導(dǎo)致殘余的有機(jī)相中水相遇到高份額的甲醇后分出少數(shù)鹽和表面活性劑，從而在泵頭上、色譜柱中分出，也導(dǎo)致了色譜柱壽命大為縮短。自己曾運(yùn)用過一根約2000元的色譜柱，正著用了四年、倒著用了兩年（倒著用測非有關(guān)物質(zhì)）。

2. 其他類型色譜柱

查詢獲取怎么科學(xué)合理地運(yùn)用與清洗保存該類型色譜柱的辦法，切勿盲動(dòng)，否則導(dǎo)致色譜柱功能急劇下降。

五、 實(shí)驗(yàn)次序

作業(yè)流程應(yīng)如下進(jìn)行：

(1) 0~2小時(shí) 制造活動(dòng)相、對(duì)照品和供試品溶液等，切勿催促昨日實(shí)驗(yàn)搭檔。

(2) 2~3小時(shí) 選用A管路注入活動(dòng)相（B、C、D管路一般不用，除非梯度洗脫才用到B管路），平衡1小時(shí)。如活動(dòng)相中有表面活性劑，主張前一晚小流速過夜，第二天上班后將流速增至1.0ml/min，平衡1小時(shí)后即可開端做實(shí)驗(yàn)。

(3) 3~5小時(shí) 測定空白溶劑，一定要做到基線不漂移后方可開端測定。所謂“不漂移”，一般系指以1.0%自身對(duì)照溶液主成分峰高約20%高度來設(shè)定的視野規(guī)模調(diào)查所得，切不可設(shè)定得過小，使得雜質(zhì)峰顯得很突兀、基線顫動(dòng)得很兇猛，弄得人很憂慮。

(4) 5~8小時(shí) 制造完所有樣品，預(yù)試了對(duì)照溶液和供試品溶液，設(shè)定好主動(dòng)進(jìn)樣程序，程序*終一針設(shè)定為小流速過夜，紫外燈關(guān)閉。切勿設(shè)定為切換至B管路洗脫，此舉因小失大。

(5) 9~24小時(shí) 定心回家，讓儀器主動(dòng)進(jìn)樣，除非不安穩(wěn)的樣品（制造一份測定一針）。充分利用下班后的16小時(shí)，做到從容不迫、鎮(zhèn)定自若。如單位還無主動(dòng)進(jìn)樣裝置，主張向領(lǐng)導(dǎo)請(qǐng)求購買，因一臺(tái)主動(dòng)比美三臺(tái)手動(dòng)。

(6) 第二天0~0.5小時(shí) 檢查并計(jì)算昨晚實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如發(fā)現(xiàn)不良記載，將流速增至1.0ml/min，平衡30分鐘后，測定從頭制造的該份樣品即可（一起回校對(duì)照一針）。無需悉數(shù)從頭測定，不要過度謹(jǐn)小慎微。

(7) 第二天0.5~2.0小時(shí) 如上沖刷色譜柱，交給這以后實(shí)驗(yàn)搭檔。

六、 液相軟件的運(yùn)用

現(xiàn)今幾大干流品牌的硬件功能已相差無幾，首要仍是軟件的規(guī)劃是否能使操作者得心應(yīng)手、為所欲為。主張掌握各軟件的批處理、修改樣品處理模板等功能，做到一勞永逸，讓軟件充分為作業(yè)所用�！澳サ恫徽`砍柴工”：自己曾用20分鐘完結(jié)500個(gè)溶出度樣品數(shù)據(jù)處理，做出溶出曲線圖。

七、 其他

1. 如需運(yùn)用正相體系，一定要單獨(dú)選用一臺(tái)儀器（如二手的、較為破舊的、淘汰的等），切勿選用異丙醇轉(zhuǎn)換，此舉對(duì)儀器損害極大，等于“自殺”。

2. 正相所運(yùn)用的活動(dòng)相（如正己烷、環(huán)己烷等），無需抽濾，混勻超聲后即可運(yùn)用，“大道至簡”。

3. 柱溫箱必須制造。如欲經(jīng)濟(jì)，可購買國產(chǎn)柱溫箱。