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制備柱裝柱機的測定步驟及注意事項制備柱裝柱機的測定步驟主要包括裝柱前準備、裝柱操作、柱效測定等流程。使用時需要注意的事項包括安全防范措施、施工前準備、柱子選擇與安裝等方面。 制備柱裝柱機的測定步驟: 1.裝柱前準備: -選擇合適柱子:根據待分離樣品的性質、量以及實驗要求等,挑選尺寸、材質合適的制備柱。例如,對于樣品量較大、需要較高分辨率的情況,可能選擇內徑較粗、柱床較長的制備柱;對于具有特殊化學性質的樣品,需考慮柱子材質是否能與之兼容。 -準備填料:依據分離目的和樣品特性,選擇合適的填料類型,如硅膠基質、聚合物基質、無機填料等,并計算所需的填料量。一般根據柱體積和填料的膨脹系數(shù)來確定,通常過量 10%-20%以補償死體積和確保柱效。 -處理填料:若填料是干燥的,需用適宜的溶劑進行預溶脹或預處理,以提高裝填效果和柱效。比如硅膠基質填料可能需要用甲醇等有機溶劑進行預處理。 -清洗空柱:將空的制備柱清洗干凈,去除內部的雜質、灰塵等,保證柱子內壁的清潔,防止對后續(xù)裝填和分離造成影響?梢杂眠m當?shù)娜軇_洗柱子,然后晾干或用氮氣吹干。 2.裝柱操作: -連接設備:將制備柱裝柱機與制備柱正確連接,確保各接口密封良好,防止在裝柱過程中出現(xiàn)泄漏。同時,連接好壓縮空氣源或其他動力源(如果是氣動裝柱機),并調整到合適的壓力范圍。 -加入填料:啟動裝柱機,將預處理好的填料緩慢而連續(xù)地裝入制備柱中。控制裝填速度,避免過快導致填料不均勻或產生氣泡,一般推薦以較低的線速度勻漿填充,如 1-2cm/min。 -壓實填料:在裝填過程中或裝填完成后,通過裝柱機施加一定的壓力對填料進行壓實,使填料在柱內分布均勻且緊密堆積,排除柱內的氣泡和空隙,提高柱效。 3.柱效測定: -連接檢測系統(tǒng):將裝填好的制備柱連接到色譜系統(tǒng)中,并與檢測器(如紫外檢測器、示差折光檢測器等)相連。 -配置樣品溶液:選擇適合的樣品,用流動相或能溶解樣品的溶劑配制成一定濃度的溶液,作為測試柱效的標準樣品。 -設定色譜條件:根據填料和樣品的特性,設定合適的流動相組成、流速、柱溫等色譜條件。 -注入樣品:用微量注射器或進樣閥將標準樣品溶液注入制備柱中,啟動色譜系統(tǒng)進行洗脫和分離。 -記錄數(shù)據:利用色譜工作站或其他數(shù)據采集系統(tǒng)記錄色譜圖,包括保留時間、峰寬、峰面積等參數(shù)。 -計算柱效:根據色譜圖上的數(shù)據,按照理論塔板高度(HETP)、對稱性(As)等指標的計算公式,計算制備柱的柱效。一般來說,理論塔板高度越小、對稱性越接近 1,柱效越高。 |