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制備柱裝柱機的測定步驟及注意事項

  制備柱裝柱機的測定步驟主要包括裝柱前準備、裝柱操作、柱效測定等流程。使用時需要注意的事項包括安全防范措施、施工前準備、柱子選擇與安裝等方面。

  制備柱裝柱機的測定步驟:

  1.裝柱前準備:

  -選擇合適柱子:根據待分離樣品的性質、量以及實驗要求等,挑選尺寸、材質合適的制備柱。例如,對于樣品量較大、需要較高分辨率的情況,可能選擇內徑較粗、柱床較長的制備柱;對于具有特殊化學性質的樣品,需考慮柱子材質是否能與之兼容。

  -準備填料:依據分離目的和樣品特性,選擇合適的填料類型,如硅膠基質、聚合物基質、無機填料等,并計算所需的填料量。一般根據柱體積和填料的膨脹系數(shù)來確定,通常過量 10%-20%以補償死體積和確保柱效。

  -處理填料:若填料是干燥的,需用適宜的溶劑進行預溶脹或預處理,以提高裝填效果和柱效。比如硅膠基質填料可能需要用甲醇等有機溶劑進行預處理。

  -清洗空柱:將空的制備柱清洗干凈,去除內部的雜質、灰塵等,保證柱子內壁的清潔,防止對后續(xù)裝填和分離造成影響?梢杂眠m當?shù)娜軇_洗柱子,然后晾干或用氮氣吹干。

  2.裝柱操作:

  -連接設備:將制備柱裝柱機與制備柱正確連接,確保各接口密封良好,防止在裝柱過程中出現(xiàn)泄漏。同時,連接好壓縮空氣源或其他動力源(如果是氣動裝柱機),并調整到合適的壓力范圍。

  -加入填料:啟動裝柱機,將預處理好的填料緩慢而連續(xù)地裝入制備柱中。控制裝填速度,避免過快導致填料不均勻或產生氣泡,一般推薦以較低的線速度勻漿填充,如 1-2cm/min。

  -壓實填料:在裝填過程中或裝填完成后,通過裝柱機施加一定的壓力對填料進行壓實,使填料在柱內分布均勻且緊密堆積,排除柱內的氣泡和空隙,提高柱效。

  3.柱效測定:

  -連接檢測系統(tǒng):將裝填好的制備柱連接到色譜系統(tǒng)中,并與檢測器(如紫外檢測器、示差折光檢測器等)相連。

  -配置樣品溶液:選擇適合的樣品,用流動相或能溶解樣品的溶劑配制成一定濃度的溶液,作為測試柱效的標準樣品。

  -設定色譜條件:根據填料和樣品的特性,設定合適的流動相組成、流速、柱溫等色譜條件。

  -注入樣品:用微量注射器或進樣閥將標準樣品溶液注入制備柱中,啟動色譜系統(tǒng)進行洗脫和分離。

  -記錄數(shù)據:利用色譜工作站或其他數(shù)據采集系統(tǒng)記錄色譜圖,包括保留時間、峰寬、峰面積等參數(shù)。

  -計算柱效:根據色譜圖上的數(shù)據,按照理論塔板高度(HETP)、對稱性(As)等指標的計算公式,計算制備柱的柱效。一般來說,理論塔板高度越小、對稱性越接近 1,柱效越高。


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